球盟会生物

使用CRISPR/Cas9基因编辑技术，研究者构建了一种转基因小鼠模型，使其在胰腺β细胞中表达特定的荧光蛋白。在C57BL/6 J小鼠中，将tdTomato外源基因插入到Ins2启动子的下游。研究者设计了针对CRISPR/Cas9系统的Ins2特异性单导RNA靶向外显子2，同时构建了供体载体。然后，将Cas9、单导RNA和供体载体在体外显微注射到小鼠受精卵中，并将这些受精卵植入假孕小鼠体内。顺利获得杂合子交配取得纯合子，并顺利获得基因型鉴定、体内成像和冰冻切片验证了敲入效果。取得了六只F0小鼠和稳定遗传的Ins2-IRES-tdTomato F1。基因组测序结果显示，与对照组相比，敲入组的Ins2外显子没有变化，只有tdTomato的碱基序列被添加，没有发生碱基突变。然而，在体内成像和冰冻切片中未观察到红色荧光蛋白（RFP）的表达，敲入基因tdTomato的蛋白表达为阴性。结果表明，tdTomato蛋白的表达和荧光强度较低，未达到检测阈值。在CRISPR/Cas9技术中，IRES连接的外源片段会影响前基因的转录水平，从而导致下游基因的低水平表达，并影响基因插入的效果。

全球超过一半的肝细胞癌（HCC）病例发生在中国，但现在针对中国人群中乙型肝炎病毒（HBV）相关HCC的全基因组分析研究非常有限。为了突破这种限制，研究人员启动了“中国肝癌图谱项目”（CLCA），旨在对中国人群中的HCC进行大规模的全基因组分析以理解其独特的发病机制和进化过程。该项目对494例HCC肿瘤样本进行了深度全基因组测序（平均测序深度为120×），并分析了匹配的对照血液样本，揭示了HBV相关HCC的详细基因组特征。研究发现，除了已知的编码区驱动基因（如TP53和CTNNB1）外，还存在6个新的编码区驱动基因（包括FGA）和31个非编码区驱动基因。此外，研究还揭示5种新的突变特征（包括SBS_H8），以及HBV整合形成细胞外环状DNA（ecDNA）的现象，这些ecDNA可导致癌基因扩增和表达增加。顺利获得功能验证实验，研究人员证实了FGA、PPP1R12B和KCNJ12等基因的突变能够显著影响HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。这项研究结果不仅丰富了人们对HCC基因组学的理解，也为HCC的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。

候选驱动因子概况

肌腱损伤急性炎症期中，巨噬细胞过度激活会导致编码骨桥蛋白OPN的SPP1过表达，影响组织再生。CRISPR-Cas13由于具有RNA编辑和快速降解的能力，在组织修复方面具有巨大潜力，但缺乏合适有效的递送方法。对此，研究人员系统筛选了针对巨噬细胞的阳离子聚合物，开发了一种能够高效递送Cas13核糖核蛋白复合物（Cas13 RNP）进入巨噬细胞的纳米簇载体。顺利获得反应性氧种（ROS）响应性释放机制，该系统能够在肌腱损伤的急性炎症微环境中特异性抑制巨噬细胞中SPP1的过表达。实验结果表明，这种靶向策略显著减少了损伤诱导的SPP1产生巨噬细胞的出现，降低了成纤维细胞的激活，并减轻了肌腱周围的粘连形成。此外，该研究还揭示了SPP1顺利获得CD44/AKT信号通路促进成纤维细胞活化和迁移的机制，并顺利获得抑制这一通路有效缓解了肌腱损伤后的粘连问题。

用于PA治疗的巨噬细胞免疫微环境激活mRNA编辑策略的示意图

脊髓损伤（SCI）是一种导致感觉自主神经和运动功能的永久性损害的严重致残性疾病。干细胞疗法，尤其是间充质干细胞（MSCs），在SCI治疗中展现出巨大潜力但其再生能力有限，这限制了其在组织再生中的应用。研究团队观察到ABPCs衍生的EVs（EVsABPC）可能携带促进组织再生的生物活性信号，因此他们从鹿角芽基祖细胞（ABPCs）中提取并修饰了细胞外囊泡（EVsABPC），并将其应用于脊髓损伤（SCI）的治疗研究。研究人员发现EVsABPC能够显著增强神经干细胞（NSCs）的增殖，促进轴突生长，减少神经元凋亡，并顺利获得调节炎症反应将巨噬细胞从促炎的M1型极化为抗炎的M2型。此外，经过工程化改造的EVsABPC（顺利获得激活细胞穿透肽修饰）能够更有效地靶向SCI损伤部位，显著改善神经再生和运动功能恢复。这些结果表明，EVsABPC是一种极具潜力的SCI治疗候选方案。

图解摘要

S-异丙甲草胺（S-MET）是我国生产和使用量最大的除草剂之一，其化学特性导致其可在土壤中持久存在以及容易顺利获得淋溶和沉降污染地表水和地下水，最终影响植物生长和顺利获得食物链危害人类生命健康。鉴于现有检测方法的局限性和对高效分析技术的迫切需求，该研究以S-metolachlor为对象，利用哺乳动物表达系统生成相关重组抗体。在成功表达抗体的基础上，成功建立了基于这些抗体的免疫分析方法，用于监测环境水样中的S-异丙甲草胺残留。icELISA结果显示，重组抗体的灵敏度和特异性与亲本单抗相似，可保持原有的生物学活性，对于江水、农田水和自来水中的S-MET，具有良好的准确性和重复性。

图解摘要

微小RNA（miRNA）是一类小的非编码RNA分子，顺利获得与特定靶基因的信使RNA（mRNA）相互作用来调控基因表达。miRNA在多种疾病的发生、开展过程中扮演着重要角色，被认为是极具潜力的疾病生物标志物。该研究利用CRISPR/Cas12a开发了一种为DBmRCA的新型miRNA检测技术。该技术利用无连接酶的哑铃探针和高灵敏度的CRISPR/Cas12a信号输出策略，实现了在30分钟内对miRNA的高精度定量分析。研究团队顺利获得临床样本验证了该技术的有效性，发现miR-200a和miR-126在肺癌组织中的表达水平显著降低，且该技术与传统方法结果一致。DBmRCA技术具有时间效率高、灵敏度强和操作流程简化等优点，为临床miRNA分析提供了一种可靠的工具，有望助力肺癌的早期诊断和治疗。

图解摘要

全球超过一半的肝细胞癌（HCC）病例发生在中国，但现在针对中国人群中乙型肝炎病毒（HBV）相关HCC的全基因组分析研究非常有限。为了突破这种限制，研究人员启动了“中国肝癌图谱项目”（CLCA），旨在对中国人群中的HCC进行大规模的全基因组分析以理解其独特的发病机制和进化过程。该项目对494例HCC肿瘤样本进行了深度全基因组测序（平均测序深度为120×），并分析了匹配的对照血液样本，揭示了HBV相关HCC的详细基因组特征。研究发现，除了已知的编码区驱动基因（如TP53和CTNNB1）外，还存在6个新的编码区驱动基因（包括FGA）和31个非编码区驱动基因。此外，研究还揭示5种新的突变特征（包括SBS_H8），以及HBV整合形成细胞外环状DNA（ecDNA）的现象，这些ecDNA可导致癌基因扩增和表达增加。顺利获得功能验证实验，研究人员证实了FGA、PPP1R12B和KCNJ12等基因的突变能够显著影响HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。这项研究结果不仅丰富了人们对HCC基因组学的理解，也为HCC的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。

候选驱动因子概况

肌腱损伤急性炎症期中，巨噬细胞过度激活会导致编码骨桥蛋白OPN的SPP1过表达，影响组织再生。CRISPR-Cas13由于具有RNA编辑和快速降解的能力，在组织修复方面具有巨大潜力，但缺乏合适有效的递送方法。对此，研究人员系统筛选了针对巨噬细胞的阳离子聚合物，开发了一种能够高效递送Cas13核糖核蛋白复合物（Cas13 RNP）进入巨噬细胞的纳米簇载体。顺利获得反应性氧种（ROS）响应性释放机制，该系统能够在肌腱损伤的急性炎症微环境中特异性抑制巨噬细胞中SPP1的过表达。实验结果表明，这种靶向策略显著减少了损伤诱导的SPP1产生巨噬细胞的出现，降低了成纤维细胞的激活，并减轻了肌腱周围的粘连形成。此外，该研究还揭示了SPP1顺利获得CD44/AKT信号通路促进成纤维细胞活化和迁移的机制，并顺利获得抑制这一通路有效缓解了肌腱损伤后的粘连问题。

用于PA治疗的巨噬细胞免疫微环境激活mRNA编辑策略的示意图

脊髓损伤（SCI）是一种导致感觉自主神经和运动功能的永久性损害的严重致残性疾病。干细胞疗法，尤其是间充质干细胞（MSCs），在SCI治疗中展现出巨大潜力但其再生能力有限，这限制了其在组织再生中的应用。研究团队观察到ABPCs衍生的EVs（EVsABPC）可能携带促进组织再生的生物活性信号，因此他们从鹿角芽基祖细胞（ABPCs）中提取并修饰了细胞外囊泡（EVsABPC），并将其应用于脊髓损伤（SCI）的治疗研究。研究人员发现EVsABPC能够显著增强神经干细胞（NSCs）的增殖，促进轴突生长，减少神经元凋亡，并顺利获得调节炎症反应将巨噬细胞从促炎的M1型极化为抗炎的M2型。此外，经过工程化改造的EVsABPC（顺利获得激活细胞穿透肽修饰）能够更有效地靶向SCI损伤部位，显著改善神经再生和运动功能恢复。这些结果表明，EVsABPC是一种极具潜力的SCI治疗候选方案。

图解摘要

S-异丙甲草胺（S-MET）是我国生产和使用量最大的除草剂之一，其化学特性导致其可在土壤中持久存在以及容易顺利获得淋溶和沉降污染地表水和地下水，最终影响植物生长和顺利获得食物链危害人类生命健康。鉴于现有检测方法的局限性和对高效分析技术的迫切需求，该研究以S-metolachlor为对象，利用哺乳动物表达系统生成相关重组抗体。在成功表达抗体的基础上，成功建立了基于这些抗体的免疫分析方法，用于监测环境水样中的S-异丙甲草胺残留。icELISA结果显示，重组抗体的灵敏度和特异性与亲本单抗相似，可保持原有的生物学活性，对于江水、农田水和自来水中的S-MET，具有良好的准确性和重复性。

图解摘要

微小RNA（miRNA）是一类小的非编码RNA分子，顺利获得与特定靶基因的信使RNA（mRNA）相互作用来调控基因表达。miRNA在多种疾病的发生、开展过程中扮演着重要角色，被认为是极具潜力的疾病生物标志物。该研究利用CRISPR/Cas12a开发了一种为DBmRCA的新型miRNA检测技术。该技术利用无连接酶的哑铃探针和高灵敏度的CRISPR/Cas12a信号输出策略，实现了在30分钟内对miRNA的高精度定量分析。研究团队顺利获得临床样本验证了该技术的有效性，发现miR-200a和miR-126在肺癌组织中的表达水平显著降低，且该技术与传统方法结果一致。DBmRCA技术具有时间效率高、灵敏度强和操作流程简化等优点，为临床miRNA分析提供了一种可靠的工具，有望助力肺癌的早期诊断和治疗。

图解摘要