1. 百倍效率的提升：

顺利获得同源基因筛选取得高活性IscB变体OrufIscB，经REC结构域工程改造后，NovaIscB的编辑效率较野生型提升100倍，最高可达40% indel效率。

2. 精准靶向突破：

有效引导RNA长度从13bp扩展至20bp，并且脱靶率显著低于现有紧凑编辑器。

3. 单载体体内递送：

融合甲基转移酶构建出OMEGAoff系统，NovaIscB与截短ωRNA可封装至单AAV载体，突破大尺寸编辑器难递送的瓶颈。

4. 持久的基因沉默：

小鼠体内单次注射OMEGAoff，靶基因表达抑制持续≥6个月，血清胆固醇水平显著降低且无肝毒性。

传统CRISPR-Cas编辑器具有尺寸过大，难以兼容AAV载体递送，且难以平衡高效编辑与低脱靶性的缺点。IscB作为Cas9的祖先蛋白虽具紧凑优势，但存在编辑效率低、引导RNA短等缺陷。因此研究人员顺利获得自然进化多样性挖掘与蛋白质工程优化的方式，旨在开发高效精准的微型编辑器。

2. REC结构域嵌合

 研究人员将Cas9的REC识别域插入OrufIscB的保守位点，并从183个嵌合体中优选出Nba-1 REC变体，其有效引导长度增加至15bp。

3. 关键环区优化

顺利获得54种REC环交换组合，最终取得NovaIscB，其有效引导长度20bp，特异性较野生型提升200倍。

图2.OrufIscB的重新设计以实现高效编辑

同时研究人员以每只动物2×10¹¹个总病毒颗粒的剂量向小鼠静脉内注射编码OMEGAoff的AAVs和Pcsk 9/Rosa 26靶向指导物，并在不同时期收集小鼠血液样品以分离血清用于测量PCSK 9蛋白和胆固醇水平。结果显示注射3周后，靶向组血清PCSK9下降70%，胆固醇降低40%，且效果可持续6个月。在安全性方面未检测到小鼠肝损伤标志物（胆红素/ALT）升高。

图5.AAV递送OMEGAoff进行体内Pcsk 9抑制的实验及结果分析

该研究顺利获得进化引导蛋白质的工程策略，成功开发出紧凑型RNA引导核酸酶NovalscB。其融合表观编辑器OMEGAoff在单AAV载体递送下实现了持久性基因调控，且靶基因表达抑制持续≥6个月，血清胆固醇水平显著降低且无肝毒性，证明了其在慢性疾病治疗中的潜力，为慢性病基因治疗提供了突破性工具。