突破基因敲入瓶颈!HES-KI带你领跑基因敲入

HES-KI基因敲入

突破基因敲入瓶颈!HES-KI带你领跑基因敲入

效率低?成本高?做基因敲入的时候这些问题总是困扰着我们。这是因为传统的基因敲入技术都会比较依赖HDR(同源定向修复)来实现,但细胞本身的修复机制往往更偏爱NHEJ(非同源末端连接),这就导致敲入成功率一再受限。即便是腺相关病毒(AAV)载体这种常用的供体递送方法,也难以避免荷载限制以及腺相关病毒基因组存在频繁串联插入的风险。但基于基因敲入在细胞治疗和工业生产领域具有巨大潜力,开发高效、精准、稳定的基因敲入方法尤为重要。

球盟会生物基因HES-KI技术正是为分析决这些难题而诞生!它顺利获得在必需基因的外显子C端区域进行CRISPR编辑,结合精心设计的转基因敲入模板,使细胞成功敲入后不仅能够恢复必需基因功能,还可以整合目的基因

HES-KI的独特之处在于其正向选择机制——如果细胞未能成功敲入,NHEJ介导的插入或缺失(Indels)将使得必需基因失活,从而直接导致细胞死亡。基于这种机制,再配合抗性筛选将确保了最终存活的细胞均为成功敲入细胞,从而显著提高了基因敲入效率







HES-KI核心优势




                                                                       01. 基因治疗中,提供稳定的CAR基因整合,提高疗效。
 
                                                                       02. 工业生产中,目的基因表达高稳定性和均一性,保障了产品大规模生产的产量和质量。 

                                                                              03. 干细胞工程中,提升iPSC的转基因敲入效率,有助于再生医学开展。

                                                                              04. 疾病建模中,构建高纯度的基因修饰细胞系,为肿瘤研究和药物开发开辟新方向。
 
                                                                              05. 功能基因组学中,筛选必需基因的关键功能域和调控元件

  1.                 

球盟会生物基因全新HES-KI技术,突破传统基因敲入瓶颈!顺利获得独创的正向选择机制,显著提升敲入效率,为您的产品生产省时省力,更能根据研究需求调节目的基因的表达水平。无论是基因治疗、工业生产、干细胞工程、还是疾病建模,HES-KI都能凭借其精准、高效、稳定的特性,为科研团队提供可靠的解决方案,有助于科研生命迈向新高度! 




  案例1  

目的:K562细胞GAPDH基因C端插入EGFP

设计:

K562细胞GAPDH基因C端插入EGFP

结果:

  • a. 使用HES-KI技术在K562细胞GAPDH中敲入EGFP,未使用抗性筛选情况下多克隆的敲入效率达到37%

使用HES-KI技术在K562细胞GAPDH中敲入EGFP,未使用抗性筛选情况下多克隆的敲入效率达到37%

  1. b. Sanger测序验证:EGFP精确敲入K562 GAPDH基因C端                                                                               

Sanger测序验证:EGFP精确敲入K562 GAPDH基因C端


  • c. K562 EGFP-KI细胞和WT细胞单克隆细胞株倍增时间差异不显著,EGFP插入后不影响K562细胞生长

K562 EGFP-KI细胞和WT细胞单克隆细胞株倍增时间差异不显著,EGFP插入后不影响K562细胞生长

  • d. 不同K562 EGFP-KI单克隆细胞株EGFP mRNA表达量差异不显著,EGFP-KI单克隆均一性好

不同K562 EGFP-KI单克隆细胞株EGFP mRNA表达量差异不显著,EGFP-KI单克隆均一性好

  • e. K562 EGFP-KI单克隆细胞株经过15代陆续在传代培养,EGFP mRNA表达量稳定

    K562 EGFP-KI单克隆细胞株经过15代陆续在传代培养,EGFP mRNA表达量稳定

  • f. K562 EGFP-KI 细胞图片


K562 EGFP-KI多克隆 K562 EGFP-KI多克隆

K562 EGFP-KI多克隆

K562 EGFP-KI单克隆  K562 EGFP-KI单克隆

K562 EGFP-KI单克隆



  案例2  

目的:293T和CHO-K1细胞GAPDH基因C端插入EGFP

设计:


293T和CHO-K1细胞GAPDH基因C端插入EGFP

结果:

  • a. 使用HES-KI技术,293T多克隆细胞中,EGFP的敲入效率达到68%。在CHO-K1多克隆细胞中,EGFP的敲入效率达到55%


使用HES-KI技术,293T多克隆细胞中,EGFP的敲入效率达到68%。在CHO-K1多克隆细胞中,EGFP的敲入效率达到55%       使用HES-KI技术,293T多克隆细胞中,EGFP的敲入效率达到68%。在CHO-K1多克隆细胞中,EGFP的敲入效率达到55%


  • b. Sanger测序验证:EGFP精确敲入293T和CHO-K1细胞GAPDH基因C端

293T:


 Sanger测序验证:EGFP精确敲入293T细胞GAPDH基因C端



CHO-K1:

 Sanger测序验证:EGFP精确敲入CHO-K1细胞GAPDH基因C端

  • c. 293T和CHO-K1 EGFP-KI多克隆细胞图片

293T:

                                                                       293T多克隆细胞图片 293T多克隆细胞图片


 CHO-K1:

                                                                       CHO-K1 EGFP-KI多克隆细胞图片 CHO-K1 EGFP-KI多克隆细胞图片







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